水沸腾时产生的热蒸汽不仅本身无菌，而且在其膨胀上升和扩散时，能把含有杂菌孢子的自然空气排开，在蒸汽中心附近形成一片小范围的无菌区。在蒸汽形成的无菌区域内接种的方法就叫蒸汽接种法。
蒸汽接种法需配备接种室和蒸汽发生装置，用一般房间作为接种室即可。蒸汽发生装置有两种设计方法，一种设在室内，一种设在室外。①设在室内。装置由火炉、烧水容器、操作台组成，火炉可用煤球炉或电炉，容器可用中型或大型铝锅代替，在锅中放入适量清水，再放上箅子，箅子上放置消过毒的接种工具。操作时将锅盖拿掉，敞开锅，在锅上方蒸汽无菌区内实施接种。室内装置设置简便，但接种量较小，只适于少量菌种移接。
②设在室外。装置由火炉、容器、送汽管和操作台等组成。火炉、容器设在室外，操作台设在室内，送汽管用于连接容器和操作台，容器可用普通铝锅或家用压力锅，送汽管可用塑料管或橡皮管。在锅盖上开一个和送汽管口径相吻合的圆孔。送汽管一头插入圆孔中固定密封好，另一头伸进接种室。接种台面板中央开一个直径10～15厘米的圆孔，送汽管的一端就用固定架固定在圆孔中心下方5厘米处。锅内加水燃烧产生的蒸汽通过送汽管由台面圆孔内喷出，即可进行接种操作。室外接种法接种量较大，适宜大规模生产。
接种前先将室内打扫干净，然后关闭门窗，减少空气流通，再向空中喷洒清洁水雾，让空气中飘浮的杂菌孢子自然沉落。接种时需要两人配合，一人负责移接菌种，另一人负责被接种的瓶（袋）开口和封口。接种过程中，所用物品必须置于蒸汽出口上方10～20厘米高度的蒸汽范围内，并要注意防止蒸汽烫伤菌种块或双手。
蒸汽接种法设备简易，操作方便，无菌程度较高，接种质量可靠。由于菌种得到无菌蒸汽的湿润，比在酒精灯上接种恢复得还快。而且蒸汽接种法不使用化学药品，还可使接种人员和菌种免受杀菌药物带来的不良影响。但此法接种的成品率比常规的箱内接种稍低，在高温季节也不宜采用。同时要注意，尤其是装置设在室内时，在一个接种室内不能连续长时间操作，以免引起一氧化碳中毒。