使用方法：盖玻片上的培养细胞用磷酸缓冲液洗3次；Carnoy’S固定液固定20min；95%乙醇中2min；70％乙醇中2min；自来水中洗涤2min；在0.1mol/L HCl中2min；转到预先加热到60℃的0.1mol/L HCI中10～20min；在0.1mol/L HCl（室温）2min；在自来水中很快洗涤；放到Schiff试剂中30min；在自来水中冲洗15min；如需要可在0.5％光绿中复染，用自来水洗涤；70％乙醇中脱水；
在95％乙醇中很快洗2次；在100％乙醇中很快洗2次；在二甲苯中透明；用中性香胶封固。
备注：此为DNA的细胞化学染色。用于细胞核和细胞核及细胞浆内DNA包涵体的染色。核和含有DNA的物质染成紫红色（即Feulgen阳性反应）。
4.苏木精-伊红染色：
苏木精1g
氧化汞0.5g
乙醇10ml
硫酸铝钾（或硫酸铝铵）20g
去离子水200ml
配制方法：在酒精内溶解苏木精，在水内溶解硫酸铝钾，加热助溶；混合苏木精和硫酸铝钾溶液，尽快煮沸；加入氧化汞，此时溶液变成深紫色；在自来水中很快冷却；滤纸过滤；装入瓶中盖紧，室温保存。
使用方法：制备涂片（或盖玻片细胞培养标本）在空气中干燥；用磷酸缓冲液洗3次，以去除蛋白；在Zenker‘s液中至少固定8h；自来水中洗30min；80％乙醇中脱水；转到0.5％碘液（用95％酒精配制）5min；转到0.5％硫代硫酸钠水溶液中5min；在自来水中洗5min；用苏木精染色lOmin：在稀释的氨水中分化，直到呈蓝色（约10min）：用0.5％伊红复染2～5s；在三缸95%乙醇中脱水（即3次），然后很快转到二缸纯乙醇中（即2次）；在二甲苯中脱脂2次，每次2-5min：用中性香胶固封。
备注：此法用于观察细胞在体外感染后的一般形态。显示细胞的变化，融合细胞形成及细胞内包涵体。嗜酸性包涵体染成亮红色。
5.Castaneda氏染色
染色：美蓝（methylene blue）1g
甲醇100ml
将美蓝溶于甲醇中，瓶子盖紧，室温保存。
复染：沙黄0（Safranine O）0.2g
去离子水100ml
冰醋酸0.3ml
去离子水300ml
配制方法：将沙黄O溶于水中；将lOOml沙黄O溶液加到300ml稀释的醋酸中混匀；室温保存。
缓冲液：
KH2P041g
去离子水100ml
Na2HP04·12H2025g
去离子水900ml
配制方法：将KH2PO4和Na2HPO4·12H2O分别溶解于水中；加100mlKH2PO4溶液到900ml Na2HPO4·12H20溶液中混合；加1ml甲醛溶液（40％甲醛）作为防腐剂；室温保存。
使用方法：将制备的涂片干燥；在0.15m1染色液、lml甲醛溶液和20ml缓冲液的混合液中染色5min；倒掉混合液，无需洗涤；复染2～5s；用去离子水冲洗；
使干燥，用中性香胶封固。
备注：此法染原生小体效果佳。原生小体染成深蓝色。
6.麦氏（Mann’s）染色
A液：甲基蓝（Methy blue）1g
去离子水100ml
B液：伊红1g
去离子水lOOml
配制方法：在水中分别溶解染料；取35ml A液和35ml B液中混合；将混合液用去离子水加至lOOml即为麦氏染色液；室温保存。
使用方法：制备涂片在空气中干燥（也适用于盖玻片细胞培养标本）；用磷酸缓冲洗涤3次，以去除蛋白质；在Zenker氏固定液中固定；在自来水中冲洗30min；
在麦氏染色液中染色60min；在含少量NaHCO。的纯乙醇中分化；稀醋酸中洗若干秒钟；二甲苯透明，中性胶封固。
备注：此法属包涵体染色，尤其对狂犬病及其他病毒包涵体染色较佳。
7.May-Grunwald和姬姆萨染色
A液：May-Orunwald染料1.25g
纯甲醇100ml
配制方法：在研钵中用少量纯甲醇将染料研磨成均匀一致的悬液；倒入烧瓶中，加入其余的纯甲醇，放在电磁搅拌器上37℃过夜；分装成100ml，用前至少在37℃保温一个月；盖紧瓶塞，室温保存。
B液：姬姆萨染料0.6g
甘油50ml
纯甲醇50ml
配制方法：用甘油在研钵中研磨姬姆萨染料；全部倒入含有少量玻璃珠的烧瓶内，在37℃振荡过夜；加入纯甲醇继续震荡直到混匀；盖紧瓶塞，室温保存，2周后即可使用。
C液：NaHC035.6g
去离子水100ml
将NaHC03溶于水中，盖紧瓶塞，室温保存。
使用方法：将标本用磷酸缓冲盐水漂洗2次，去除蛋白质；在纯甲醇中固定3～5min；再转到新的纯甲醇中3-5min；空气中干燥；用May-Grunwald染色液覆盖lOmin无需洗涤，转到新鲜制备的姬姆萨染色液中20min（用去离子水将姬姆萨稀释lO倍，在100ml的此溶液中加5.6％NaHCO34滴）；在自来水中洗涤；在两缸丙酮中洗，每次3min；在两缸二甲苯中洗，每次3min；用中性香胶封固。细胞核染成紫红色，胞浆染成蓝色。
备注：此法对显示细胞感染后的变化效果较好。如细胞的大致变化、融合细胞形态、细胞内包涵体等，尤其是细胞浆的变化，它可显示出多种颜色反应，本法适用于盖玻片培养物或其他培养物染色。
8.结晶紫染色
1％结晶紫溶液400ml
甲醇80ml
自来水或蒸馏水300ml
使用方法：将单层细胞或组织薄片在染色液中浸泡5min，然后伯清水洗涤。
备注：本法常用于单层细胞的染色，观察病毒感染后细胞病变及空斑形态、大小和数目。
第六节分子生物学试剂的配制
一、0.5mol/L EDTA溶液（pH8.O）
EDTA二钠盐·2H20186.1g
去离子水定容至1000ml
配制方法：先将EDTA倒入800ml水中，用磁力搅拌器剧烈搅拌；用NaOH调pH值（约20g的NaOH），定容至1L；分装，高压消毒灭菌。
二、5mol/L NaCl溶液
NaCl 292.2g
去离子水定容1000ml
分装，高压灭菌。
三、1mol/L MgCl2溶液
MgCl2·6H20203.3g
去离子水定容1000ml
四、3mol/L乙酸钠（pH5.2）
NaAc·3H20408.1g
去离子水定容1000ml
配制方法：先将乙酸钠溶于800ml去离子水中；用冰醋酸调pH到5.2，定容至1L；分装，高压灭菌。
五、1moI/L DTT（二巯苏糖醇）
DTT 3.09g
0.01mol/L（pH5.2）乙酸钠溶液20ml
过滤除菌，每管1ml，-20℃保存。
六、β-巯基乙醇（BME）
市售BME原液约14.4mol/L，置4℃保存于棕色瓶中。
七、10％SDS（十二烷基硫酸钠盐）
SDS 100g
去离子水定容1000ml
配制方法：先将SDS溶于800ml去离子水中；置68℃水浴中溶解，加数滴浓盐酸调pH到7.2；定容至1000ml，分装。
备注：称SDS时要戴口罩，10％SDS不必灭菌。
八、1mol/L乙酸镁
Mg（Ac）2·4H20214.46g
去离子水定容1000ml
过滤除菌。
九、5mol/L乙酸铵
NH4Ac 385g
去离子水定容1000ml
过滤除菌。
十、5mol/L乙酸钾
60ml的5mol/L KAc加入11.5ml冰醋酸和28.5ml H20所配成的溶液。
十一、20倍SCC
NaCI 175.3g
柠檬酸钠88.2g
去离子水定容1000ml
用适量水溶解盐类，加入几滴10mol/L NaOH调pH值至7.0，定容，分装高压灭菌。
十二、20倍SSPE
NaCI 174g
NaH2P04·2H2027.5g
去离子水定容1000ml
用适量水溶解盐类，10mol/L NaOH（约6.5m1）调pH值至7.4，定容，分装高压灭菌。
十三、溴化乙锭（10mg/m1）
EB 10mg
去离子水lml
将EB置Eppendorf管中，涡旋混合，确保完全溶解，Eppendorf管包以锡纸，4℃保存。EB是强诱变剂，称取时必需戴手套和口罩。
十四、100％TCA（三氯乙酸）
TCA 500g
去离子水227ml
十五、不同pH TE
溶液
Tris
pH8.0，EDTA
pH
pH7.4
pH 7.6
pH 8.0
TE
7.4
7.6
8.0
10mmol/L
10mmol/L
10mmol/L
1mmol/L
十六、SET（或称TNE）溶液
溶液中含10mmol/L pH8.0的Tris-HCl，100mmol/L的NaCl和lmmol/L pH8.0的EDTA。
十七、50倍Denhardf溶液
Ficoll 5g
聚乙烯吡咯烷酮5g
牛血清白蛋白5g
去离子水500ml
过滤，25m1分装，-20℃保存。
十八、常用电泳缓冲液
1.10倍TBE（Tris-硼酸盐）缓冲液
Tris碱108g
硼酸55g
EDTA 9.3g
去离子水1000ml
调pH到8.2
2.10倍TPE（Tris-磷酸盐）缓冲液
TRIS碱108g
85％磷酸15.lml
pH8，0.5mol/L EDTA 40ml
3.10倍TAE（Tris-乙酸盐）缓冲液
Tris碱48.4g
冰醋酸11.42ml
EDTA 9.3g
去离子水定容1000ml
调pH到8.2
4.0.025mol/L Tris－0.192mol/L Gly缓冲液（pH8.5）
Tris碱3.0285g
甘氨酸14.41g
去离子水1000ml
十九、常用凝胶加样缓冲液
1.6倍类型10.25％溴酚蓝、0.25％二甲苯腈蓝、40％（w/v）蔗糖水溶液。4℃贮存。
2.6倍类型20.25％溴酚蓝、40％（w/v）蔗糖水溶液。4℃贮存。
3.0.5mol/L Tris-HCl甘油液
Tris 3.0g
}7.5ml
Lmol/L HCl 24ml
去离子水50ml
甘油2.5ml
溴酚蓝（O.1％）10ul
二十、制备不同浓度聚丙烯酰胺的配方
试剂
聚丙烯酰胺凝胶％
10
7.5
5.0
4×凝胶缓冲液
Tris—HCl pH8.9
7.5ml
7.5ml
7.5ml
30％丙烯酰胺
（Acr：Bis=30：0.79）
10ml
7.5ml
5ml
10％四甲基乙二胺
（TEMED）
250ul
200ul
150ul
lO％过硫酸铵
（AP）
250ul
200ul
150ul
去离子水
12.44ml
14.9m1
14.7ml
总量
30.4ml
30.3ml
30.2ml
二十一、4倍凝胶缓冲液（Tris-HCl pH8.9）
Lmol/L HCl 48ml
Tris 36.6g
去离子水定容200ml
二十二、30％丙烯酰胺溶液
丙烯酰胺29g
甲叉双丙烯酰胺1g
去离子水定容100ml
二十三、10％过硫酸铵（AP）
过硫酸铵1g
去离子水10ml
最好临用时配制；4℃保存一周，-20℃保存可用一个月。
二十四、AgN03（O.011mol/L）溶液
AgN031.85g
去离子水定容1000ml
二十五、NaOH-甲醛溶液（0.75-O.1mol/L）
NaOH 30g
36％～38％甲醛7.6ml
去离子水定容1000ml
二十六、5％冰醋酸（固定液）
冰醋酸50ml
去离子水950ml
二十七1％琼脂糖或1％琼脂
琼脂糖（或琼脂）1g
电泳缓冲液100ml
二十八、氯仿-异戊醇（24：1）
氯仿24ml
异戊醇1ml
二十九、熏蒸饱和酚
饱和酚液100ml
8-羟基喹啉0.1g
配制方法：加热68℃去离子水饱和熏蒸酚；加入8-羟基喹啉（100g酚加0.1g），使酚变为黄色；用等体积1.0mol/L pH 8.0Tris缓冲液抽提，再用0.1mol/L pH 8.0含0.2％β-巯基乙醇的Tris缓冲液抽提数次，酚溶液的pH应大于7.6；
此酚溶液在平衡缓冲液覆盖下4℃可保存一个月；纯化和制备酚溶液都要戴手套，以免损伤皮肤。