一、材料的选择
选取生长健壮、无病虫害的母株为试验材料。
二、外植体的选择
钻石花系列：以幼嫩叶片为外植体。
新星花系列：以带花芽的幼嫩花茎为外植体。
三、外植体的消毒
钻石花系列：选取幼嫩叶片，饱和洗衣粉水刷洗表面至表面无明显尘土，然后自来水下冲洗2h。在超净工作台上，垂直叶脉将叶片剪成两半，放入广口瓶中，70%酒精消毒45s～1min，再用0.1%氯化汞溶液消毒5min～6min，无菌水冲洗4次～5次后倒掉最后一次清洗用的无菌水，备用。
新星花系列：选取幼嫩的带有花芽的花茎，饱和洗衣粉水刷洗表面（顺着花芽生长方向刷洗）至表面无明显尘土，然后自来水下冲洗2h。在超净工作台上，将花茎剪成2cm左右的茎段，保证每个茎段带有1个花芽，然后放入广口瓶中，70%酒精消毒1min，再用0.1%氯化汞溶液消毒6min～8min，无菌水冲洗4次～5次后倒掉最后一次清洗用的无菌水，备用。
四、培养条件
1.诱导
钻石花系列：在超净工作台上将消毒处理之后的外植体用无菌镊子从广口瓶中取出置于无菌滤纸上，让其吸干叶片上多余的水分，将叶片剪成1cm长小段，然后接种在准备好的外植体诱导培养基中（MS+6-BA1.0mg/L+IAA0.1mg/L+蔗糖3%+琼脂0.6%，pH值5.8～6.0），将叶片背面接触培养基。培养条件控制在温度25℃±2℃，光照时间12h/d～14h/d，光照强度120μmol·m-2·s-1～200μmol·m-2·s-1，继代周期30d。
新星花系列：在超净工作台上将消毒处理之后的外植体用无菌镊子从广口瓶中取出置于无菌滤纸上，让其吸干叶片上多余的水分，剪掉花茎段两端褐化部分，然后将花芽朝上接种在准备好的外植体诱导培养基中（MS+6-BA0.3mg/L+NAA0.6mg/L+蔗糖3%+琼脂0.6%，pH值5.8～6.0）。培养条件控制在温度25℃±2℃，光照时间12h/d～14h/d，光照强度120μmol·m-2·s-1～200μmol·m-2·s-1，继代周期30d。
2.继代
钻石花系列：在诱导培养基上培养30d后，将叶片转入继代培养基中（其中，品种P104、OR93、OR5-1的继代培养基为：MS+6-BA0.2mg/L+NAA0.6mg/L+抗坏血酸200mg/L+蔗糖3%+琼脂0.6%，pH值5.8～6.0；其余品种的继代培养基为：MS+6-BA0.3mg/L+NAA0.6mg/L+抗坏血酸200mg/L+蔗糖3%+琼脂0.6%，pH值5.8～6.0）继代，将叶片背面接触培养基。培养条件控制在温度25℃±2℃，光照时间12h/d～14h/d，光照强度120μmol·m-2·s-1～200μmol·m-2·s-1，继代周期30d。
新星花系列：在诱导培养基上培养30d后，将叶片转入继代培养基中（MS+6-BA0.3mg/L+NAA0.6mg/L+抗坏血酸200mg/L+蔗糖3%+琼脂0.6%，pH值5.8～6.0）继代，将叶片背面接触培养基。温度25℃±2℃，光照时间12h/d～14h/d，光照强度120μmol·m-2·s-1～200μmol·m-2·s-1，继代周期30d。
3.生根培养
钻石花系列：当不定芽长至2cm～3cm时，将其转入生根培养基中进行生根培养，生根培养基为：1/2MS+IBA1.0mg/L+NAA0.2mg/L+多效唑0.2mg/L+抗坏血酸200mg/L+蔗糖3%+琼脂0.6%，pH值5.8～6.0。培养条件控制在温度25℃±2℃，光照时间12h/d～14h/d，光照强度120μmol·m-2·s-1～200μmol·m-2·s-1。
新星花系列（品种429、867、127）：当不定芽长至2cm～3cm时，将其转入生根培养基中进行生根培养，生根培养基为：1/2MS+IBA1.0mg/L+NAA0.2mg/L+多效唑0.2mg/L+抗坏血酸200mg/L+蔗糖3%+琼脂0.6%，pH值5.8～6.0。培养条件控制在温度25℃±2℃，光照时间12h/d～14h/d，光照强度120μmol·m-2·s-1～200μmol·m-2·s-1。
4.试管苗移栽
当株高长至2.5cm～3.5cm，根长为1cm左右时进行试管苗的移栽（钻石花系列生根培养15d，新星花系列生根培养20d）。首先，将试管苗连同培养瓶一起移至智能温室，炼苗1周。移栽前1d～2d，打开瓶盖，然后用镊子小心取出试管苗，洗净根部琼脂，用800倍代森锰锌溶液浸泡1min～2min，移栽于128穴盘中，其中基质成分为草炭∶蛭石∶珍珠岩=5∶3∶2，移栽后7d内保持温度25℃±2℃，湿度85%～90%，以后逐渐降低温度和湿度至智能温室内自然状态。移栽后10d叶面喷施肥0.2%磷酸二氢钾，然后每7d交替喷施0.2%磷酸二氢钾和0.2%尿素。当长至6片～8片叶片，叶幅8cm～10cm时即可定植。
【思考题】
1.钻石花和新星花系列在组织培养过程中外植体取材有什么不同？
2.补血草组培中不同外植体接种方法有什么不同？