1.在接种前4h用甲醛高锰酸钾熏蒸接种室,并打开室内紫外灯进行灭菌。
2.接种前20min打开超净工作台的风机及台上的紫外灯。
3.洗净双手,在缓冲间换好专用实验服、帽子、口罩,并换拖鞋。
4.上工作台后,用酒精棉球擦拭双手、台面、接种工具和培养皿,然后将接种工具和培养皿用酒精灯灭菌。
5.用自来水将材料冲洗干净→用70%~75%的酒精消毒10s~30s→0.1%氯化汞溶液浸泡1min~10min→无菌水冲洗3次~10次→放在无菌滤纸上沥干水分。
6.切割材料:外植体原切口剪掉,茎切成含有1个节间的茎段,约1cm,节上留1/3节下留2/3,切除部分小叶。
7.打开待接瓶口,并瓶口过火,将外植体轻轻插入培养基中,注意形态学上下端,瓶口再过火,扎口。
8.清理台面。
【思考题】
1.接种室内操作前需做哪些准备工作?
2.用于接种室室内及操作人员表面消毒的消毒剂有哪些?使用方法是什么?
3.简述无菌操作过程及方法。