下列情况的申请单和标本不予接受:
(1)申请单与相关标本未同时送达病理科。
(2)申请单中填写的内容与送检标本不符合。
(3)标本上无有关患者的标本申请单联号或其他标志。
(4)申请单内填写的字迹潦草不清。
(5)申请单中漏填重要项目。
(6)标本严重自溶、干涸等。
(7)其他可能影响细胞检查可行性和诊断准确性的情况。
病理科不能接受的申请单和标本一律当即退回,不予存放。
临床医师釆取的细胞标本应立即涂片,并尽快放置于盛有固定液(95%乙醇)的容器内。对于需要做特殊项目检查(如微生物、特殊染色、免疫组织化学或分子生物学检查等)的标本,应按相关的技术要求进行固定或预处理。
病理医师只对病理科实际验收标本的细胞病理学诊断负责。
病理科应建立与送检方交接申请单和标本的手续制度。具体交接方法由各医院病理科自行制定。
二、申请单和标本的编号、登记
病理科验收人员应在已验收的申请单上注明验收日期,及时、准确编号(病理号),并逐项录入细胞标本登记簿或计算机内。严防病理号的错编、错登。
细胞标本的病理号可按年编序,或连续性(不分年度)编序。
同一病例同一次的申请单、细胞标本登记簿(包括计算机录入)、放置细胞标本的容器或其涂片的病理号必须完全一致。
病理科应建立验收人员与诊断医师之间申请单和涂片的交接制度。具体交接方法由各医院病理科自行制定。
在病理科内移送标本(或涂片)时,必须确保安全,严防放置标本(或涂片)的容器倾覆、破损和标本(或涂片)的散乱、缺失等。
细胞学制片的基本要求
一、细胞涂片的制备
(一)涂片质量的基本要求
1将检材涂布于载玻片的右(或左)2/3处,另1/3部位粘贴标签。
2单向涂布检材,避免细胞变形。
3均匀涂布检材,涂片厚薄适当。
4红细胞过多的涂片,可酌情进行溶解红细胞处理。
(二)涂片方法
1涂抹法用棉签或针头将标本单向、均匀地涂抹于载玻片上。
2拉片法将一滴检液置于一张载玻片上,再用另一张载玻片叠加其上并予轻压,再将该两张载玻片朝反方向拉动,从而获得两张涂片。
3推片法将一滴检液置于一张载玻片的右端,再用另一张窄边光滑的载玻片作为推片,与滴液载玻片呈40°夹角、自右向左匀力推动检液,形成涂片。
(三)痰涂片的制作
1送检的痰液应是由肺内咳出,最好是清晨空腹时自肺内深咳出的痰液。
2核查无误的收验痰液,应立即制作涂片(通常为2~3张)。
3用细签或无钩镊子挑取痰液置于载玻片上,并左右往复薄涂,随即投入固定液中。
4痰液中呈现下列性状的成分可能含有癌细胞,应注意选取制作涂片:①血丝;②灰白色痰丝(形如白色细线,微细螺旋状,牵引时可伸长);③透明痰液(可拉成较长细丝)。同时,应及时在细胞学检查申请单上记录痰液性状。
5检查痰液中的肿瘤细胞,一般应连续送检3次以上。
(四)粘膜、皮肤表面刮取(刷取、拉取)物和分泌物涂片的制作1.阴道排出物、子宫颈刮取物涂片通常由妇产科医师将已制作、固定后的涂片送交病理科检查(注意由子宫颈外口上皮移行带刮取细胞涂片)。
2.支气管镜、胃镜等内镜的粘膜刷取物涂片(粘膜刷片)刷片通常由内镜医师制作、固定后送交病理科检查。
3食管拉网涂片从食管拉出的套网气囊适量放气后,将气囊套网在载玻片上滚动涂片,尤应将套囊上的血丝、灰白色物制作涂片。
套网中的小块组织可用来制作石蜡包埋切片。
4其他眼、耳、鼻、咽、口腔、皮肤等处病变(溃疡性病变等)的分泌物通常由临床医师以涂抹法制片送检。
(五)液体涂片的制作
液体标本(检材)包括乳头溢液、胸水、腹水、尿液、胃液、脑脊液、穿刺液、冲洗液、灌注液等。除乳头溢液外,其他液体检材一般均应先行离心(2000rpm,10~20分钟)后,取其沉淀物制作涂片;液体检材也可用细胞涂片离心机(cytospin)直接制作细胞涂片。制作好的涂片应立即固定和染色。(注意:及时在细胞学检查申请单上记录液体标本的性状和数量)液体标本的离心沉淀物较多时,将制作涂片后剩余的沉淀物固定于4%中性甲醛中1小时,然后用擦镜纸或绸布将其包裹,制作石蜡包埋切片。
1乳头溢液直接滴于载玻片上制作涂片。
(1)患者乳腺触及肿物时:用手指自肿物远方沿乳腺导管引流的方向轻力按摩挤压,获取溢液,宜取中段溢液和血性溢液做涂片。
(2)患者乳腺未触及肿物时:可自乳晕周围向乳腺外周轻力按摩挤压,获取溢液。
2胸水和腹水
(1)由患者体内抽取的胸水或腹水应尽快送交病理科验收,检液量以200~500ml为宜。因故(例如远途)延时送达时,须在标本中加入40%甲醛(加入量为送检胸水、腹水量的1/5),或加入等量的50%乙醇-生理盐水。
(2)胸水、腹水的离心,采取容器底部的液体10ml(包括可能存在的沉淀物),移入离心管内进行离心。
(3)离心后,倾去全部上清液,将离心管底部含有沉淀物的液体摇匀并用吸管吸出适量,滴注于载玻片上,制作涂片。
3尿液
(1)制作方法同胸水、腹水。
(2)尿液含有胶状物时,应先将其除去。清除方法:用0.5mmol/L氢氧化钠调节尿液pH 至6.0;离心后,倾去上清液,再向沉淀物中加入95%乙醇5~10ml(固定细胞),静置5分钟后加入蒸馏水并轻摇(溶去胶状物);再次离心后,取沉淀物制作涂片。检查尿液中的肿瘤细胞,一般应连续送检3次以上。
4.胃液、胃冲洗液制作方法同胸水、腹水。
5.脑脊液
(1)制作方法同胸水、腹水。
(2)脑脊液内细胞一般较少,可用微孔滤膜过滤法、沉淀法或纤维捕捉法收集细胞,制作涂片。
6.冲洗液、灌洗液、穿刺液涂片制作方法同胸水、腹水。二、肿物细针穿刺物涂片(一)实施细针穿刺的准备工作1应由掌握细针穿刺技术的病理技师或医师,按照细针穿刺技术操作常规,亲自对确有适应证且无禁忌的患者采取穿刺物。针吸操作成功与否和操作者的熟练程度直接相关,因而要求穿刺操作者最好相对固定的专人完成,便于积累经验。多数报告都证实,初试者成功率很低。
2实施细针穿刺术的病理技师或医师应先了解患者的临床情况,向患者和(或)患者授权人说明实施细针穿刺的意义、局限性及其他相关问题等,取得患者和(或)家属的知情及理解,并签署由各医院制定的”申请实施细针穿刺术细胞病理学诊断患方知情同意书“。
3合格的手术操作环境。
4必备的适用手术器械和其他相关设施。
5适应证
(1)体表肿物:乳腺、甲状腺、涎腺、淋巴结、前列腺、皮肤及皮下肿物等。
(2)胸腔肿物:肺、胸膜和纵隔等处的肿物。
(3)腹腔肿物:肝、胰、肾、肾上腺、腹腔内、腹膜后和盆腔内等处的肿物。
(4)颅内肿物:通过脑穿刺及脑脊液检查。
6禁忌证难以控制的咳嗽、肺动脉高压症、进行性肺气肿、出血性体质及有”晕针史“等。
(二)肿物细针穿刺的注意事项
1.确认肿物部位并估计其大小、与表皮距离、质地(实性、囊性、硬度等),以指导穿刺的方向、深度和用力程度。
2.必须严格实行无菌操作。
3.根据肿物大小及其血供情况选择适用型号的穿刺用针头及针筒。穿刺用针头的外径为0.6~0.9mm,安置在一次性空注射器(大多用10ml,小者用5ml,大者可用50ml)上。
4.针吸法穿刺术操作要点
(1)用手固定肿物,将安装在空注射器上的穿刺用针头刺入肿物,然后根据肿物的质地、密度外拉管芯2cm 左右。
(2)迅速上下提插注射器管芯10~20次(其间变换针头方向3~4次),以使肿物不同部位的较多内容物吸入针头和注射器内。
(3)将注射器针筒与针头分离(管内负压因而解除);随后,将该注射器针筒与仍插于肿物内的针头相接,拔出针头。
(4)针吸完成后,使注射器脱离开针头,吸取空气,再安到针头上。然后将吸出物推出到2~3张清洁的载玻片上,进行涂片。
(5)涂片方法:用针头将载玻片上的吸出物轻轻均匀地拨开,或用推片法朝一个方向展开(不可双向往返推移)。
(6)吸出物过少时,可向离心管内冲洗穿刺针头,再将冲洗液离心,然后取其沉淀物涂片。
(7)吸出物较多时,可用适量的50%乙醇-生理盐水液将涂片后注射器和针头内剩余的吸出物冲洗至离心管中,离心后,取其沉淀物制作常规石蜡包埋切片。
(8)吸出物中含有细小组织块时,应将其制作常规石蜡包埋切片。
(9)内脏肿物穿刺时,必须在影像学检查的引导下用较长细针进行穿刺。
(10)穿刺操作完成后,即在细胞病理学检查单上书写穿刺记录。
三、组织印片、压片的制备
(一)组织印片
1用锋利刀片剖开刚切取的新鲜肿瘤组织或淋巴结等,然后用清洁载玻片轻压于组织剖面处,将组织表面的细胞成分印在玻片上。用稍微加温的载玻片制备印片时,可印得较多细胞。
2制作淋巴结印片前,应先用滤纸吸去淋巴结切面上的血液和组织液。
(二)压片
1选取微小薄片组织平铺于一张载玻片上,再用另一张载玻片叠加其上并予轻压。
2脑组织质软,易于制作压片;稍硬的组织必须切成细碎薄片制作压片。
四、涂片的固定
用于HE 染色和巴氏染色的涂片必须湿固定,即涂片后立即进行固定。乳头溢液涂片和液体标本离心沉淀物涂片,应待涂膜潮干(即周膜稍干而其中央区域未干)时进行固定。用于瑞氏染色、May-Grunwald-姬姆萨染色和免疫细胞化学染色的涂片,必须干固定,即待涂片稍干后再进行固定。
(一)固定液
1.乙醇-冰醋酸液95%乙醇∶冰醋酸=99∶1,常用。
2.乙醇-乙醚液95%乙醇49.5ml,乙醚49.5ml,冰醋酸1ml,较常用。
3.甲醇滴加在干燥涂片上,用于瑞氏染色、May-Grünwald-姬姆萨染色和免疫细胞化学染色。4.丙酮适用于酶类染色。
5.Carnoy液由无水乙醇、氯仿、冰醋酸按6∶3∶1比例混成,适用于显示核酸、糖原、粘液的染色。涂片在Carnoy 液固定3~5分钟后,应移入95%乙醇中继续固定。
对于液体标本的离心沉淀物、食管拉网获取的小块组织或吸出物中的细小组织块等,固定于4%中性甲醛中1小时,然后制作常规石蜡包埋切片。
(二)固定方法
1浸入法
(1)将稍为干燥(不能完全干燥)的涂片直接浸泡在固定液中,至少15~30分钟。
(2)因细胞容易脱落,因此一个盛有固定液的容器只宜固定一例标本的涂片。同一容器固定多例涂片时,有可能造成肿瘤细胞的交叉污染。
(3)必要时可将标本涂在硅化载玻片上,以防脱落。
(4)固定液重复使用时,应先用滤纸过滤。
(5)95%乙醇固定液多次重复使用时,必须测定其浓度,乙醇浓度低于90%时应予弃用。
2滴加法将固定液滴加于平放的干燥涂片上,应避免因固定液挥发造成沉淀。
(三)固定后未染色涂片的保存和邮寄
涂片固定15分钟后取出,立即滴加数滴甘油于涂膜上。对该涂片进行染色前,应先将其置于95%乙醇中溶去甘油。