五、涂片的染色
最常用于细胞病理学涂片检查的是苏木精－伊红（HE）染色和巴氏染色。一些特殊染色、组织化学染色和免疫细胞化学染色也可用于细胞病理学的涂片检查。
（一）苏木精－伊红（HE）染色
参见”苏木精－伊红（HE）染色“。
（二）巴氏染色
巴氏（Papanicolaou）染色时，细胞透明度好，细胞结构清晰，色彩丰富而鲜艳，主要用于妇科细胞学涂片、痰涂片和富含鳞状上皮细胞的涂片检查。
1.试剂配制
（1）Harri苏木精液：参见前文”苏木精－伊红（HE）染色“。
（2）盐酸－乙醇液：
浓盐酸1ml70％乙醇99ml
（3）橙黄G6液：
橙黄G60.5g蒸馏水5ml
无水乙醇95ml磷钨酸0.015g
先将橙黄G6溶于蒸馏水中，再加入无水乙醇，然后加入磷钨酸。
A 液：亮绿0.5g，溶于5ml蒸馏水中，溶解后加入无水乙醇至100ml。
B 液：伊红0.5g，溶于5ml蒸馏水中，溶解后加入无水乙醇至100ml。
C 液：俾士麦棕0.5g，溶于5ml蒸馏水中，溶解后加入无水乙醇至100ml。
②EA36工作液：
EA36储备液的A 液45ml碳酸锂饱和水溶液1滴EA36储备液的C 液10ml磷钨酸0.2g EA36储备液的B 液45ml2.染色程序（1）将已经固定的涂片置于80％乙醇中2分钟。
（2）蒸馏水洗2分钟。
（3）苏木精液染核10～12分钟，自来水洗。
（4）盐酸－乙醇液分化约20～30秒，至涂片呈淡橙红色。
（5）流水冲洗10～15分钟，蒸馏水洗。
（6）依次用80％、95％乙醇脱水，各2分钟。
（7）橙黄G6液染色3～5分钟。
（8）95％乙醇洗2～3次，洗去多余染液。
（9）EA36工作液染色3～5分钟。
（10）95％乙醇洗2～3次，洗去多余染液。
（11）无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。
3.染色结果细胞核呈深蓝色，核仁呈红色。不同分化类型的鳞状上皮细胞，其细胞质颜色各异：角化细胞呈粉红色，不全角化细胞呈橙黄色，角化前细胞呈淡蓝或淡绿色；红细胞呈橙红或鲜红色；白细胞的细胞质呈淡蓝绿色；粘液呈淡蓝或粉红色。
（三）瑞氏（Wright）染色
瑞氏染色一般用于血液涂片，也可用于检查肿瘤细胞。
1.试剂配制
（1）瑞氏染液：
瑞氏染料1g
甲醇600ml
将瑞氏染料放入研钵内，加入适量甲醇与之混合研磨，使染料逐渐溶解。将溶解的染液倾入另一玻璃瓶内，然后再加入适量甲醇继续研磨未溶解的染料。如此反复多次，直至染料完全溶解、甲醇用完为止。染液避光保存备用。
（2）磷酸盐缓冲液：
无水磷酸氢二钠6.5g蒸馏水1000ml
磷酸二氢钠4gpH：6.5～7.0
2.染色程序
（1）涂片自然干燥。
（2）滴加瑞氏液染色1分钟。
（3）滴加等量的磷酸缓冲液，轻轻摇荡玻片或用洗耳球在玻片上轻轻吹气，使两液体混合均匀，持续10～15分钟。
（4）流水洗去染液。
（5）涂片风干后，二甲苯透明，中性树胶封片。
3.染色结果细胞核呈紫红色，细胞质呈紫蓝色，粘液呈粉红色或淡蓝色。
（四）May－Grünwald－姬姆萨（Giemsa）染色May－Grünwald－姬姆萨染色适用于造血系统的细胞涂片和鉴别恶性淋巴瘤的类型。May－Grünwald 原液和姬姆萨原液配制繁琐，可直接购买。
1.试剂配制
（1）May－Grünwald工作液：
May－Grünwald原液1份蒸馏水6～10份使用前配制。
（2）姬姆萨工作液：
姬姆萨原液1份蒸馏水6～10份使用前配制。
2.染色程序
（1）涂片自然干燥，蒸馏水洗1～2分钟。
（2）May－Grünwald工作液染15～30分钟。
（3）自来水冲洗，洗去载玻片上的染液，蒸馏水稍洗。
（4）姬姆萨工作液染15～30分钟。
（5）自来水冲洗，洗去载玻片上的染液。
（6）涂片风干后，二甲苯透明，中性树胶封片。
3.染色结果细胞核呈紫红色，细胞质和核仁呈蓝紫色。
（五）Rakoff染色
Rakoff染色用于阴道细胞学涂片快速测定雌激素水平。
1.试剂配制
5％淡绿水溶液83ml1％伊红水溶液17ml
将两液混合后使用。
2.染色程序
（1）用细胞刷沿阴道侧壁刷取粘膜鳞状上皮细胞，放入装有1～2ml生理盐水的试管内。
（2）在试管内滴入3滴Rakoff染液，用细胞刷在染液中轻摇混合。
（3）将1～2滴混合液滴于载玻片上，制成涂片。
（4）待涂片干燥后，用中性树胶封片。
3.染色结果鳞状上皮细胞的嗜酸性和嗜碱性细胞质区分明显。角化前细胞的核呈网状，角化细胞的固缩核呈基本不着色的空泡状。
（六）猩红－固绿染色
猩红－固绿染色用于显示性染色体。
1.试剂配制
（1）猩红染液：
水溶性比布里西猩红磷钨酸
（2）固绿染液：1.0g
0.3g冰醋酸
50％乙醇5.0ml 100ml
固绿
磷钨酸磷钼酸
2.染色程序0.5g
0.3g
0.3g50％乙醇冰醋酸100ml 5.0ml
（1）涂片经95％乙醇固定后，置于70％乙醇中2分钟。
（2）猩红染液中5分钟。
（3）50％乙醇中漂清多余染液。
（4）固绿染液中分化2～5小时。每小时在显微镜下观察细胞质和网状核膜是否呈现绿色；如果绿色满意，立即取出涂片（一般约需4小时）。固缩核呈鲜红色。
（5）50％乙醇中5分钟。
（6）依次置于70％、95％和无水乙醇中各2分钟。
（7）置于二甲苯溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ中透明，各2分钟。
（8）中性树胶封片。
3.染色结果胞核呈淡绿色；性染色质呈粉红色、”V“字形或贴着于核膜呈三角形。在性染色质周围可见空泡。
（七）Fouchet染色
Fouchet染色用于显示胆色素。
1.染液配制
A 液：25％三氯醋酸水溶液。
B 液：10％三氯化铁水溶液。
A、B液皆小量新鲜配制为宜。使用时，取A、B 液各30ml混匀（当天使用）。
2.染色程序
（1）涂片经95％乙醇固定后，置于蒸馏水中漂洗。
（2）Fouchet液中染5分钟。
（3）蒸馏水Ⅰ、Ⅱ中各1分钟。
（4）苦味品红溶液中染5分钟。
（5）95％乙醇Ⅰ、Ⅱ中漂洗。
（6）无水乙醇Ⅰ、Ⅱ中脱水。
（7）二甲苯Ⅰ、Ⅱ中透明，中性树胶封片。
3.染色结果胆色素呈橄榄绿色，胶原纤维呈红色，涂片背景呈黄色。
（八）硫酸亚铁染色
硫酸亚铁染色用于显示黑色素。
1.试剂配制
（1）2.5％硫酸亚铁水溶液。
（2）铁氰化钾醋酸液：
铁氰化钾1g
蒸馏水99ml冰醋酸1ml
（3）1％冰醋酸水溶液。
（4）核固红液：
核固红0.1g硫酸铝5g
蒸馏水100ml麝香草酚50mg
先把硫酸铝溶于蒸馏水，然后加入核固红，稍加温溶解，冷却后过滤，最后加入麝香草酚。
2.染色程序
（1）涂片经95％乙醇固定后，置于蒸馏水中漂洗1～2分钟。
（2）2.5％硫酸亚铁溶液中1小时。
（3）蒸馏水Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ中漂洗，各1分钟。
（4）铁氰化钾醋酸液中30分钟。
（5）1％冰醋酸液中1分钟。
（6）蒸馏水漂洗。
（7）核固红液中染1～2分钟。
（8）蒸馏水漂洗。
（9）依次95％乙醇、无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。
3.染色结果黑色素呈深绿色或深蓝色，涂片背景呈红色或粉红色。
（九）快速硝酸银染色
快速硝酸银染色用于显示卡氏肺孢子虫和真菌。
1.试剂配制
（1）硝酸银乌洛托品。
常备液：3％乌洛托品溶液100ml与5％的硝酸银溶液5ml 充分混合。
工作液：常备液25ml、蒸馏水25ml与5％硼酸钠2ml充分混合。
（2）固绿。
常备液：固绿0.2g充分溶解于0.2％冰醋酸液100ml中。工作液：常备液10ml与蒸馏水40ml混合。
（3）5％铬酸溶液，1％亚硫酸氢钠溶液，0.2％氯化金溶液，2％硫代硫酸钠溶液。
2.染色程序
（1）涂片经95％乙醇固定后，置于蒸馏水中漂洗中1分钟。
（2）5％铬酸溶液（43℃水浴）中2分钟。
（3）5％铬酸溶液（58℃水浴）中15分钟。
（4）自来水漂洗。
（5）1％亚硫酸氢钠溶液中30秒。
（6）自来水冲洗15秒。
（7）蒸馏水Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ漂洗各1分钟。
（8）硝酸银工作液（43℃水浴）中2分钟。
（9）硝酸银工作液（58℃水浴）中2～3分钟。
（10）蒸馏水Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ中漂洗。
（11）0.2％氯化金溶液中30秒。
（12）蒸馏水Ⅰ、Ⅱ中漂洗。
（13）2％硫代硫酸钠溶液中1分钟。
（14）自来水冲洗15秒。
（15）固绿工作液中染30秒。
（16）自来水冲洗15秒。
（17）蒸馏水Ⅰ、Ⅱ中漂洗。
（18）95％乙醇、无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。
3.染色结果卡氏肺孢子虫和真菌皆呈黑色，形状清晰；糖原和粘蛋白呈玫瑰色或灰色；涂片背景呈淡绿色。
（十）高碘酸－无色品红（PAS）染色
PAS染色用于显示多糖（糖原及粘蛋白等），参见第六部分”高碘酸－无色品红（PAS）法“。
细胞病理学诊断报告书及其签发
细胞病理学诊断可为临床医师诊断疾病（尤其是肿瘤）提供重要的参考依据。细胞病理学诊断报告书必须由具有主检资格的病理医师签署后发出，主检病理医师签名的字迹应清晰能辨。
（一）细胞病理学诊断表述的基本类型
直接表述性诊断适用于穿刺标本的细胞病理学诊断报告。根据形态学观察的实际情况，对于某种疾病或病变做出肯定性（Ⅰ类）细胞学诊断、不同程度意向性细胞学诊断（Ⅱ类），或是提供形态描述性细胞学诊断（Ⅲ类），或是告知无法做出细胞学诊断（Ⅳ类）。具体分类如下：
Ⅰ类：检材部位、疾病名称、病变性质明确和基本明确的病理学诊断。
Ⅱ类：不能完全肯定疾病名称、病变性质，或是对于拟诊的疾病名称、病变性质有所保留的病理学诊断意向，可在拟诊疾病／病变名称之前冠以诸如病变“符合为“、”考虑为“、”倾向为“、”可能为“、”提示为“、”疑为“、”不能排除（除外）“之类的词语。
Ⅲ类：检材涂片所显示的病变不足以诊断为某种疾病（即不能做出Ⅰ类或Ⅱ类病理学诊断），只能进行病变的形态描述。
Ⅳ类：送检标本因过于细小、破碎、固定不当、自溶、严重受挤压（变形）、被烧灼、干涸等，无法做出细胞病理学诊断。
间接分级性诊断用于查找恶性肿瘤细胞的诊断。
Ⅰ级：未见恶性细胞。
Ⅱ级：查见核异质细胞。
Ⅱa：轻度核异质细胞。
Ⅱb：重度核异质细胞。
Ⅲ级：查见可疑恶性细胞。
Ⅳ级：查见高度可疑恶性细胞。
Ⅴ级：查见恶性细胞。
（二）细胞病理学诊断的局限性（假阴性或假阳性诊断）假阴性是指在恶性肿瘤患者的有关标本中未能查见恶性细胞。假阴性率一般为10％左右。因此，细胞病理学检查的阴性结果并不能否定临床医师的恶性肿瘤诊断。
假阳性是指在非恶性肿瘤患者的有关标本中查见“恶性细胞”。假阳性率通常≤1％。因此，细胞病理学诊断应密切结合患者的临床资料，对于临床上未考虑为恶性肿瘤患者的阳性细胞学诊断应持慎重态度。
（三）细胞病理学诊断报告书的基本内容
患者的基本情况项目，包括细胞病理号、姓名、性别、年龄、送检医院或科室（住院或门诊）、住院号或门诊号、送检或收验日期等。
细胞病理学诊断的表述。
必要时或条件允许时，可酌情就细胞病理学诊断及其相关问题，附加某些建议（例如进行其他有关检查、再做活检、科外会诊、密切随查或随访等），注释和（或）讨论。
经过本科和（或）科外会诊的病例，可将各方的细胞病理学诊断意见附于该例细胞病理学诊断报告书中。
计算机图文打印的细胞病理学诊断报告书提供的细胞学图像应具有典型（代表）性，放大倍数适当。
（四）细胞病理学诊断报告书的发送
一般情况下为病理科自接受送检标本至签发细胞病理学诊断报告书的时间1或2个工作日。
因某些原因（包括特殊染色、免疫细胞化学染色、疑难会诊等）不能如期签发细胞病理学诊断报告书时，应以口头或书面形式告知有关临床医师或患方，说明迟发报告书的原因。
病理科应有专人发送细胞病理学诊断报告书。住院患者的细胞病理学诊断报告书应发送至有关临床科室；本院门诊患者和外院患者的细胞病理学诊断报告书的发送方法由各医院病理科自行决定。
细胞病理学诊断报告书的经收人员（包括患方人员）必须履行病理科规定的签收手续。
已由病理科发出的细胞病理学诊断报告书被遗失时，一般不予补发；必要时，经病理科主任同意可以抄件形式补发。
资料管理和会诊
细胞病理学检查的资料管理及细胞病理学会诊的有关规定，参见本书关于组织病理学检查的资料管理及组织病理学会诊的有关章节。