书城自然科学植物组培快繁技术案例与实训
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第24章 案例二十三枸杞组织培养技术

一、选材及灭菌

外植体接种:选当年生生长旺盛、健壮、无病虫害的优良的枸杞单株,取新梢的幼嫩茎段。取材时间:最好早晨9:00~10:30。

清洗:将材料剪成10cm~30cm的枝条,去掉叶片,用自来水冲洗30min,用饱和洗衣粉溶液刷洗,再用清水冲洗30min。

消毒:在超净工作台上,将材料剪成3cm~4cm,放入100mL广口瓶,用70%酒精消毒30s~50s,0.1%氯化汞溶液消毒3min~5min,用无菌水清洗5遍~6遍。

二、培养条件

接种:在超净工作台上,将材料剪成1个~2个芽的茎段并修剪茎段两端,接种于芽诱导培养基中,每瓶接3株。

诱导芽培养基:MS+6-BA0.5mg/L+IAA1.0mg/L+蔗糖3%+琼脂0.6%诱导芽及继代增殖培养:继代培养周期为20d;芽增殖倍数为3倍~4倍;生长标准为株高2cm~3cm;增殖方式为丛生芽;继代增殖培养基为MS+6-BA0.5mg/L+IAA0.8mg/L+蔗糖3%+琼脂0.6%。

培养室环控条件:温度为22℃~25℃;光照强度为200μmol·m-2·s-1~240μmol·m-2·s-1;光照时间为12h/d。每周喷药2次。

三、试管生根苗培养

试管苗标准:选择试管苗株高2cm~3cm,有3片~4片叶的苗转入生根培养基中。

生根苗环控条件:温度25℃~28℃,光照强度200μmol·m-2·s-1~240μmol·m-2·s-1,光照时间12h/d。

生根培养基:1/2MS+IBA0.4mg/L+蔗糖1.5%+琼脂0.6%试管生根苗移栽标准:试管苗健壮,株高3cm~4cm,根长0.1cm~0.5cm,4片~5片叶,根数3条~5条。

四、试管苗移栽

炼苗:当试管苗70%生根转移到温室即可炼苗。温度为20℃~22℃,光照强度400μmol·m-2·s-1~560μmol·m-2·s-1,时间7d~10d,试管苗移栽前3d敞口炼苗,炼苗期间要定期喷药,注意防病防虫。

试管苗移栽:当诱导生根苗高3.0cm以上,有3条以上长0.5cm左右的根时,可出瓶移栽。移栽前将根部培养基清洗干净,根部用800倍代森锰锌溶液浸泡1min~2min,未生根苗根部速蘸50ppm吲哚丁酸。

穴盘:选择128穴盘,清洗干净后用0.2%高锰酸钾溶液浸泡10min后捞出晾干备用。将混配好的基质装入穴盘中放入炼苗地点,移栽前1d对基质浇透水,移栽时用50%多菌灵800倍溶液喷洒消毒。

基质配比:草炭∶蛭石∶珍珠岩=2∶1∶1

环控条件:移栽8d~10d内10:00~16:00遮阳,每15min喷雾1次,每次喷雾3s~5s,温度22℃~25℃,湿度80%~85%。8d~10d后有60%~70%生根,10:00~16:00每40min喷雾1次,每次8s,温度20℃~22℃,湿度50%~60%。

日常管护:移栽15d后每天中午喷雾1次,每次6s,20d后取消喷雾,喷施0.1%磷酸二氢钾,10d1次。

【思考题】

1.试管苗移栽原材料选择的标准和原则是什么?

2.试管苗移栽基质理化指标是什么?