一、实验目的与要求
1.掌握试管苗炼苗驯化的技术和方法。
2.掌握试管苗移栽技术要点及其管理措施。
二、实验原理
植物快繁中获得的小植株，长期生长在试管或三角瓶内，体表几乎没有什么保护组织，生长势弱，适应性差，要露地移栽成活，完成由“异养”到“自养”的转变，需要一个逐渐适应的驯化过程，这个过程也叫炼苗。移栽前试管苗生长在无菌、有完全营养供给、温度恒定、湿度很高（100%的相对湿度）、光照较弱的特殊条件下，虽有叶绿素，但因异养生活，因此存在着很大的脆弱性。试管苗根系不发达，移栽后便很难保持水分平衡。这样一旦被直接移出试管，投入到一个有菌、缺少完全营养供给、变温、低湿、强光的条件下，它们是很难成活的。因此，移栽是离体快繁全过程的最后一个环节，也是很关键的一个环节。
三、实验材料、仪器、试剂
1.材料
枸杞、树莓或鸢尾等植物试管苗。
2.仪器和用具
营养钵、烘箱、镊子、三角瓶、洒壶、铲子、塑料薄膜、竹竿、温室。
3.试剂
草炭、蛭石、腐殖土、珍珠岩。
四、实验步骤
1.葡萄试管苗驯化移栽
（1）炼苗
①将培养瓶从培养架上小心取下，解开绳子，去除封口材料。
②用胶头滴管在培养基表面滴入5mL蒸馏水，置瓶于温室中进行培养。
③控制炼苗培养条件为温度22℃～25℃，光照强度为1600μmol·m-2·s-1～3200μmol·m-2·s-1，培养3d～7d。这一过程中要注意保湿，防止试管苗萎蔫。
④当试管苗颜色转为浓绿，富有光泽时即达到驯化效果。
（2）移栽
①按照草炭∶蛭石∶腐殖土＝1∶1∶1，或草炭∶珍珠岩∶腐殖土＝1∶1∶1的比例配制营养土。
②将营养土置于150℃烘箱中干热消毒40min，冷却至室温。
③经消毒的营养土分装至营养钵中。
④用镊子将试管苗从培养瓶中小心取出。
⑤用自来水洗净试管苗根部附着的培养基，注意不要伤到根系或幼嫩的叶片。
⑥将试管苗移栽到盛有营养土的营养钵中。移苗时动作要轻，不要伤了根系，注意少伤苗，伤口过多会造成死苗。
⑦用洒壶对试管苗进行浇水，水流要轻缓，防止根系露出营养土表面。
⑧将营养钵移至温室或小拱棚中，用塑料薄膜进行覆盖。
⑨保持培养温度为25℃～30℃，空气湿度为80%～100%，5d～7d后可逐渐通风，10d～14d后即可除去覆盖物。
（3）移栽后的管理
①根据营养钵内土壤的湿润情况，每隔1d喷水1次，但不要过湿，以免烂根。
②适当使用一些杀菌剂进行喷雾，7d～10d喷1次，保护幼苗，防止病害发生。
③可使用0.1%的N∶P∶K=20∶20∶20平衡肥料或1/2MS大量元素的水溶液作追肥，加快苗的生长与成活。
2.甘蓝试管苗驯化移栽
（1）炼苗
①将培养瓶从培养架上小心取下，去除封口膜。
②把试管苗置于室温条件下培养4d～5d。
③每天可用喷壶在培养基和植株表面喷洒少量蒸馏水，防止试管苗萎蔫。
（2）移栽
①用镊子将根长为2cm，具3片～5片叶的试管苗从培养基中小心取出。
②流水将根系基部琼脂轻轻冲洗干净，注意不要伤害植株。
③将试管苗移栽于经过高温高压灭菌的蛭石∶腐殖土＝1∶1的营养土中。
④用洒壶对营养土浇透水，并用塑料薄膜进行覆盖，保温保湿10d。
（3）移栽后的管理
①移栽1周后可适当减少遮阴增加光照，10d后可去掉遮盖物，注意避免阳光直射，并适当通风。
②移栽温度控制在20℃～23℃，环境相对湿度为70%～80%。
③期间可喷施1次氮肥，并用多菌灵进行喷雾，防止病害发生。
3.月季试管苗驯化移栽
（1）炼苗
①将培养瓶从培养架上小心取下，打开一半封口膜。
②置瓶于遮阳网下进行培养5d。
③炼苗温度为22℃～25℃，每天可在培养基表面滴入少量蒸馏水，防止试管苗萎蔫。
④当试管苗颜色转为浓绿，植株生长健壮时可结束炼苗。
（2）移栽
①用镊子将长根且苗高2cm左右的试管苗从培养基中取出。
②在流水下轻轻洗去根系基部琼脂，注意不要伤根。
③将试管苗根部用0.5%～1%的多菌灵或甲基托布津溶液浸泡消毒2min～3min。
④然后移栽于珍珠岩∶草炭∶腐殖土＝1∶1∶1的混合基质中。
⑤用洒壶对基质浇透水，然后用小拱棚对试管苗进行覆盖。
（3）移栽后的管理
①在移栽初期，注意遮阴、保温。
②1周后可适当减少遮阴增加光照，2周后可揭去遮盖物，但要注意避免阳光直射以免引起叶片枯死或萎蔫。
③在此期间，要加强叶面喷水，增加空气湿度，同时5d～7d喷施1次氮肥。
④1个月后，苗高4cm～5cm，有4片～5片真叶时，移入小盆定植。
⑤加强肥水管理，注意摘心、整形，半年后即可成型并开花。
五、实验结果与分析
试管苗是从温、湿恒定，全营养的无菌环境中培养出来的离体再生苗，它娇嫩，适应能力差，移栽较难成活是该时期特点。而保证试管苗的高移栽成活率是生物技术应用于育种和生产的关键之一。抓好移栽前炼苗，移栽时洗净试管苗基部的培养基，移栽后保温、保湿，是保证试管苗高成活率的关键措施。
【作业】
1.记录试管苗生长状态变化。