一、目的与要求
1.查阅相关资料,撰写自选植物的可行性报告与技术报告。
2.按照植物组培快繁操作流程进行各种操作(建外植植体、试管苗增殖、生根、移栽),每进行一步对成品拍照。
3.组员协同负责人准备材料做幻灯片,由负责人向大家汇报本组实训的结果,其他学生听报告并帮助分析原因提出改正意见。
4.撰写实训报告,组内成员尽量不一致,实训报告主要包括做了哪些工作,实训失败的原因包括哪些。
二、材料、仪器、试剂
材料:自选植物的外植体(茎切段、顶芽、种子、叶片等)。
仪器:高压灭菌锅、超净工作台、接种工具、培养瓶、培养架、玻璃器皿。
试剂:消毒剂(70%酒精,0.1%氯化汞溶液)、无菌水、5mol/L氢氧化钠,MS或B5基本培养基四类母液(大量元素、微量元素、铁盐及有机物)、蒸馏水。
三、操作步骤
1.每6人~8人1组,每组选1名组长,组长对组员进行分工,工作主要包括查阅相关资料、整理有效信息、确定快繁植物种类、制定组培快繁技术路线、准备实施。
2.配各类母液,包括基本培养基、激素、氢氧化钠等,制备蒸馏水、无菌水。涮洗培养瓶、容量瓶、量筒、移液管等各类用到的玻璃器皿。
3.制备三类培养基(培养基的多少由组内成员协商而定),一类是所定植物外植体启动培养基,一类是所选植物试管苗增殖培养基,另一类是试管苗生根培养基。按照技术路线报告配制移栽基质(珍珠岩、蛭石、草炭、细沙、田园土、壤土由实验室提供)。
4.开始对外植体预处理、消毒,接入外植体启动培养基,10d~15d后将未污染的、已萌动的外植体转入启动培养基,1个月后将新长出的植株转入增殖培养基,待1个月后将植株不定芽或新梢剪下转入生根培养基,最后将生根的试管苗驯化后栽入配好的基质,对每一步成品(或转接前)对其拍照,直到所转接的外植体全部死亡,整个操作即可停止(不管后续的工作完成与否)。
5.整个操作过程安排专门的人观察记录,认真填写下列几张表,观察记录人员要对本组成员的工作认真负责。
6.由组长统一收集观察记录表、所拍照片,组内成员协助组长根据实训进展状况做成幻灯片,给其他组员汇报,其他组员要根据汇报情况提出问题并进行打分,这些过程中实训指导老师要循序引导。
7.完成课后作业与实训报告。
四、注意事项
1.各组组员要分工明确、责任到人,组长在汇报的时候先简单地介绍一下组内成员及各组员具体工作职责,防止有些人人浮于事。
2.某些工作最好由一人操作,尽量减少实验误差,降低污染概率。如配母液由一人负责,制备培养基由专人负责,接种由专人负责。
3.估计多数同学不能进行到试管苗移栽生根或移栽阶段,主要原因有污染、死亡、褐化。组内相互讨论,分析实训失败的原因。
【作业】
1.上交××植物组培快繁可行性(经济价值、应用价值、推广前景等)报告与技术方案。
2.上交幻灯片(按统一标准)及配套的观察记录表、照片(照片必须细选)。
3.撰写实训报告,主要包括实训失败的原因及主要操作内容。