百合是百合科百合属
的多年生草本植物,靠鳞茎宿存,大多数可供观赏或兼有药用、食用等价值。百合种类丰富,花形花色各异,是国际市场上非常畅销的花卉之一。过去百合因长期采用营养繁殖,病毒积累影响品质。近几十年,依靠组织培养的方法,在百合的优良品种快速繁殖及新品种培育等方面取得了非常好的效果。
一、选材与消毒
百合的茎尖、茎段、珠芽、鳞片、鳞茎盘和叶片、花器官及根等均可用作外植体,都能分化出芽。将繁殖材料在自来水下冲洗干净后,先用70%的酒精浸泡30s,然后用0.1%氯化汞溶液消毒15min~20min,再用无菌水冲洗4次~6次,在超净工作台上把消毒后的材料切成5mm~8mm的小块备用。
二、初代培养
在超净工作台上将消毒处理之后的外植体接种在准备好的外植体诱导培养基中,培养条件控制在温度25℃±2℃,光照时间12h/d~14h/d,光照强度120μmol·m-2·s-1~200μmol·m-2·s-1,继代周期30d,其外植体诱导培养基分别如下。
MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L+2,4-D0.3mg/L
MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.1mg/L(壮苗培养基)
(以上培养基如无特别说明,其蔗糖浓度均为3%,琼脂浓度0.6%,pH值5.8~6.0。)20d后,茎尖及茎段基部或鳞茎块即可分化出6个~10个不定芽;30d后,芽苗长2cm~3cm。
三、继代培养
将诱导出的分化苗2cm~3cm横切成带节的茎段,较小的芽苗可不切,转接到MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L的培养基上,20d后,平均每个外植体可分化出9个小芽。
四、生根培养
当不定芽长至2cm~3cm时,将其转入生根培养基中进行生根培养,其培养条件控制在温度25℃±2℃,光照时间12h/d~14h/d,光照强度120μmol·m-2·s-1~200μmol·m-2·s-1,其生根培养基为1/2MS+IBA0.8mg/L+NAA0.01mg/L。
(以上培养基如无特别说明,1/2MS培养基仅为大量元素减半,其蔗糖浓度均为1.5%,琼脂浓度0.6%,pH值5.8~6.0。)15d后,苗基部分化出小鳞茎;30d后,小鳞茎直径可达0.4cm~0.8cm,同时形成发达的根系。
五、试管苗移栽
当株高长至2.5cm~3.5cm,根长为2cm左右,粗壮且具较多白色根毛时进行试管苗移栽。移栽前,打开培养瓶盖,将瓶苗置于温室炼苗6d~7d后,然后用镊子小心取出试管苗,洗净根部琼脂,用800倍代森锰锌溶液浸泡1min~2min,根部蘸适当浓度的生根剂,移栽于上层为3cm厚纯净河沙,下层为草炭∶蛭石∶珍珠岩=5∶3∶2(百合的移栽基质:上层为3cm厚纯净河沙,下层为草炭∶蛭石∶珍珠岩=1∶1∶1)基质中。移栽后每7d喷洒多菌灵灭菌,相对湿度保持在70%~80%,温度控制在22℃±2℃。
大多数百合品种在组培中形成的小鳞茎都会有一个休眠过程,所以在移栽到基质中生长一段时间后即会休眠。打破休眠的方法是在5℃低温下处理100d左右。
【思考题】
1.百合等地下茎类植物采用鳞片作为外植体有什么注意事项?鳞片生长时间、生长部位对植株再生有什么不同?
2.百合生根培养中母液配制有什么要点?
3.百合增殖方式是什么?
4.如何打破百合鳞茎休眠?