一、试验设计的相关理论
在植物组织培养的研究过程中,准确的试验设计和数据分析是开展研究的前提,作好了试验设计不仅可提高试验的可信度,而且可以节省很多过程,提高效率。数据分析更是十分重要的过程,我们可以通过数据分析来确定试验的最终结果。
一般来说,任何一种常用的试验设计均可以应用于植物组织培养的试验设计中。我们可以根据影响植株组织培养的因素和水平来确定我们的研究方案。正交试验设计是植物组织培养试验中常用的一种设计方法。
正交试验设计是适用于多因素试验的一种设计方法,它是采用现成的正交表来进行试验设计和统计分析,以多因素试验的部分实施代替全面实施,与一般多因素试验相比,试验次数将大幅度减少,同时有可能产生主效和互作的混杂。
由于正交试验设计及其结果分析都要用正交表,因此,有必要先对正交表作一个介绍。
一般正交表为Lk(mj),L表示正交表,k表示用该正交表进行设计时需要做的试验处理数(或一次重复的试验小区数),m表示试验因素所取的水平数,j表示用该正交表进行设计时最多可能安排的因素数。
正交表有很多种,有相同水平的正交表,如2水平正交表,3水平正交表,4水平正交表以及5水平正交表等,还有混合水平的正交表。所以进行正交设计时,首先遇到的问题是如何选用适宜的正交表。
二、在植物组织培养过程中如何应用正交设计
当我们想对一种植物进行组织培养技术研究时,筛选适合不同阶段的培养基是最基本的。我们首先想到的是主要有哪些因素影响该植物的组织培养,也就是说,我们应该通过对比哪几种因素来确定适合的培养基。通常情况下,基本培养基的成分(营养元素)、激素种类和浓度、蔗糖浓度、pH值、其他附加物等因素都是需考虑的对象。下面我们将举例说明在植物组织培养过程中如何应用正交设计。
假设我们的某种植物的组织培养需要对比研究6-BA浓度、IBA浓度和蔗糖浓度(3个因素),那么我们可参照相关报道或自己已有的研究经验来确定每个因素的不同水平。假设我们确定6-BA浓度为0.2mg/L、0.4mg/L、0.6mg/L,IBA浓度为0.1mg/L、0.2mg/L、0.4mg/L,蔗糖浓度为1.5%、3%、4.5%。那么我们就可以通过筛选合适的正交表来进行试验设计。
在我们的假设中,研究对象主要是3个因素,而每个因素又分别有3个水平,通过查阅正交表发现L9(34)满足我们的试验要求,因此,可根据L9(34)正交表来设计我们的试验。在填正交表之前可以将各因素各水平赋值。
在进行试验设计时,为了进一步做到试验设计的科学性和合理性,减小试验的各种误差,在试验设计的过程中应考虑每个处理的重复,一般来说,每个处理应至少安排3个重复。
三、数据分析
试验的结果主要以试验数据来体现,如何对试验数据进行准确的分析是试验成败的关键。数据采集是数据分析的前提。在植物组织培养过程中,我们需要对出愈率、愈伤大小、分化率、株高、生根率、根数、根长等指标(具体指标应根据试验的具体安排而定)进行定期采集,然后对采集的数据进行分析。最简单的数据分析方法就是记录不同阶段各种指标的平均值,然后进行比较,确定不同阶段的最适合的试验方案。如果需要对试验进行更精细的数据分析,我们可以对试验数据进行方差分析,多重比较等方法来确定不同阶段的最适合的试验方案。当然,我们也可应用一些统计软件(SPSS、SDS等)来对我们的试验数据进行分析。
【思考题】
1.设计1种~2种草本植物的组织培养试验设计。
2.对试验数据进行正交设计和分析。